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    C1q作用知多少

    2018-09-21
    作者:賀蕓芬博士    王亞麗  博士   韓震

    在上一期的介紹中,我們介紹了治療性抗體與Fc受體結合的必要性和常用的檢測手段。同時也提到,抗體的Fc端除了和Fc受體結合外,還和C1q結合啟動CDC(complement-dependent cytotoxicity)。先來簡單介紹一下CDC和C1q吧。


    補體系統是人和脊椎動物在長期進化過程中獲得的非特異性免疫系統,也在特異免疫中發揮作用,含有30多種可溶性蛋白和膜蛋白,即補體。補體可以被抗原抗體復合物或其他細胞外來物所激活,導致外來入侵物的裂解或被吞噬。補體通過三條即獨立又交叉的途徑被激活,即經典途徑、旁路途徑和凝集素途徑,這三條途徑形成了完整的補體系統(圖1)。CDC是補體參與的細胞毒性作用,即補體系統的經典途徑??贵w和補體C1q首先結合,接著補體C2-C9被激活形成攻膜復合物(MAC)對靶細胞發揮裂解作用。很多的抗體都可以引起CDC作用,如CD20、CEA等的抗體。


    圖1. 由Fc端驅動的ADCC和CDC作用機制


    CDC除了細胞檢測之外,也成了眾多抗體藥體外檢測的必檢項,常規檢測的方法為ELISA, 但是ELISA為終點技術無法得到解離速率,而且IgG和C1q的結合較弱,而ELISA方法中的洗滌過程,可能會把一些弱結合的C1q洗掉,導致結果中出現假陰性,從而引起通過ELISA檢測的體外C1q結合實驗與實際CDC效應不符合?,F在越來越多的企業選擇SPR和BLI的技術檢測抗體和C1q的相互作用,這兩種方法不但穩定而且可直接得出親和力和動力學。在2015年的報道中,利用protein L捕獲抗體,檢測抗體和C1q的相互作用如圖2。 在近期的報道中也介紹了利用BLI技術,通過鏈霉親和素(SA)傳感器固化抗體,來檢測抗體和C1q的相互作用如圖3 。


    圖2.Biacore 檢測不同抗體和C1q的親和力和動力學




    圖3. BLI 檢測不同抗體和C1q的親和力和動力學


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    參考文獻:

    1、Tsuguo Kubota et.al., Engineered therapeutic antibodies with improved effector functions. Cancer Science 2009; 100: 1566–1572.

    2、Rekha Patal et.al., IgG subclass specificity to C1q determined by surface Plasmon resonance using Ptotein L capture technique.Analytical Biochemistry 2015;479:15-17.

    3、Wei zhou et.al., Characterization of Antibody-C1q Interactions by Biolayer Interferometry. Anal Biochem. 2018 ;549:143-148.

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